欢迎您访问BIO-DL Corporation (宝予德公司)网站

新闻资讯

您当前的位置:首页 > 新闻资讯 > 技术文章
技术文章

植物组织类样本DNA提取完整解决方案

更新日期:2019年11月28日 大字 小字
分享至:



植物DNA的提取和纯化是植物基因工程研究的基础操作。实施分子标记、基因图谱、基因指纹图谱、基因文库构建、遗传多态性分析、DNA重组、RAPD(随机引物多态性DNA)、RFLP(限制性酶多态性)、基因分离及遗传转化和鉴定等都以提取DNA为前提。



目前,对从植物组织中提取DNA方法的要求是:简便、有效、快捷以及经济。与动物组织相比,植物组织含有较多的多糖和其他次生代谢产物(酚、酯、萜、色素等),这给高质量的DNA提取带来较多的困难。尤其是多糖成分是影响DNA纯度最常见的问题。如何做到既去除这些污染物又能相对保持高的产量,并且能简捷有效地提纯,一直是植物生物技术研究者探索的问题。


01

普通的植物

对于普通的植物(低酚、低酯、低糖等)如:水稻、白菜、苋菜、南瓜、黄瓜、西红柿、上海青、菠菜、笋瓜、冬瓜、莲藕、山药、竹笋等;我们可以选用普通植物DNA提取试剂盒(磁珠法)试剂(货号:K318)。


02

多糖、多酚类植物

对于多糖、多酚类植物(香蕉、西瓜、苹果、梨等果肉,红薯、马铃薯等块茎,棉花、月季、枇杷、益母草、夏枯草等人参、曼陀罗、向天果、射干、桔梗、满山红、金鸡纳霜等药用植物)可以选用多酚植物DNA提取试剂盒(磁珠法)试剂(货号K319),针对类似的植物我们经过长期的优化,可以得到较好的实验结果。


以叶片为例,叶片需先剪碎成小块,以便放入1.5ml离心管。最佳样本的长度应在1cm 以下。重量不超过250mg,推荐使用50mg,如果是植物种子粉末可以使用10mg-20mg粉末即可。


叶子


样本数量较少的情况下:可以使用手持式(宝予德)研磨仪,将植物的组织切碎后放入1.5ml 尖底离心管中,将研磨棒的头部碾压植物组织,打开研磨仪的开关,直至肉眼看到植物组织研磨成碎末。




样本数量较多的情况下:可以使用HF Extract组织研磨仪 可以同时处理2-192个样品(需配不同适配器)。将植物的组织切碎后放入2ml的研磨管中,加入钢珠或二氧化锆珠8-16颗(根据试剂情况灵活选择),按照如下方案编辑研磨程序:




对于茎部纤维化比较严重的组织或者根部样本,要配合液氮处理(将植物组织用剪刀剪切<0.5cm,放入研磨管中),使用配套的冷冻研磨套件(如下图),将研磨罐中灌入液氮冷冻植物样品,等液氮挥发后,快速拧好研磨罐放入研磨仪。执行程序:




提取过程:
1

打开研磨后的管子(预先6000rpm离心30sec防止管子上的碎片或碎末飞出,污染实验室),加入裂解液APL(需要预热)400-600 μl,放入水浴锅中孵育30 min-1 h。


2

孵育后,12000 rpm 离心3min,取上清100μl-200μl 上清(含淀粉多的样品容易糊化,可以增加离心时间至5-10min)


96孔预分装板


3

加入预分装96孔板中的第1、7列,然后放入核酸提取仪中(如下图),插好磁棒套。点击运行程序。



4

20min后,完成DNA的提取。转移5、11列中的DNA 至1.5ml离心管中,使用超微量分亚博体育百度计(Mcro-Drop )检测核酸浓度:



5

记录检测结果,进入下步扩增或将DNA保存至-20℃。




上一篇:李曼大会浅析